生物傳感器是由固定化并具有化學(xué)分子識別功能的生物材料、換能器件及信號放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)。

1 生物傳感器基本原理

1.1 反應(yīng)基礎(chǔ)

生物傳感器反應(yīng)基礎(chǔ)基于常見的四類生物反應(yīng):即酶促反應(yīng)、免疫學(xué)反應(yīng)、微生物反應(yīng)和生物反應(yīng)中伴隨著發(fā)生的物理量變化。

1.2 工作原理

生物傳感器的組成見圖1。生物傳感器選擇性的好壞完全取決于它的分子識別元件，而其他性能則和它的整體組成有關(guān)。生物反應(yīng)過程產(chǎn)生的信息是多元化的，選擇不同的轉(zhuǎn)換器對信息進(jìn)行轉(zhuǎn)換對生物傳感器的設(shè)計十分重要，常見的生物傳感器的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)換器有電化學(xué)式、光學(xué)式等。

2 生物傳感器在水監(jiān)測中的應(yīng)用

應(yīng)用于水質(zhì)監(jiān)控的生物傳感器所使用的分子識別元件主要有酶、微生物、細(xì)胞器。在水質(zhì)監(jiān)控中的主要應(yīng)用有BOD、細(xì)菌總數(shù)、硫化物、有機農(nóng)藥、酚和水體富氧的測定等。

2.1 用于監(jiān)測BOD的生物傳感器

BOD是衡量水體有機污染程度的重要指標(biāo)。測定BOD的傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)稀釋法所需時間長、操作繁瑣、準(zhǔn)確度差。BOD傳感器不僅能滿足實際監(jiān)測的要求，并且有快速、靈敏的特點。BOD傳感器的工作原理〔，〕:以微生物的單一菌種或混合種群作為BOD微生物電極，由于水體中BOD物質(zhì)的加人或降解代謝的發(fā)生，導(dǎo)致水中的微生物內(nèi)外源呼吸方式的變化或轉(zhuǎn)化，藕聯(lián)著電流強弱信號的改變，一定條件下傳感器輸出的電流值與BOD的濃度呈線性關(guān)系。用于制作BOD生物傳感器的微生物主要有酵母、假單胞菌、芽抱桿菌、發(fā)光菌和嗜熱菌等。

張悅等研制的BOD測定儀采用聚乙烯醇凝膠包埋方式固定酵母，并將固定化酵母直接分散懸浮在溶液中，將DO探頭插人溶液中測量BOD，實驗表明，最佳測量條件為溫度30‘C,pH 5.0、固定化細(xì)胞15g，可在20 min內(nèi)實現(xiàn)BOD的快速測定。在BOD為。- 200 mg/L的范圍內(nèi)有較好的線性測量關(guān)系，且有較好的準(zhǔn)確性。但離實際應(yīng)用還有相當(dāng)距離，需做進(jìn)一步的研究。

國外，兩種新的酵母菌種SPT1和SPT2被分離出來并且被固定在玻璃碳極上，以構(gòu)成用于測量BOD的微生物傳感器。其誤差為土10%。將該傳感器用于測量紙漿廠污水中BOD濃度，其最小值可達(dá)到2m g/L，所用的時間僅為5m in（3） 。

2.2 用于快速測定細(xì)菌總數(shù)的生物傳感器

細(xì)菌總數(shù)是水質(zhì)樣品中的重要污染指標(biāo)之一。目前普遍采用平板菌落記數(shù)法，測定周期長，準(zhǔn)確度不高，主觀誤差大。生物傳感器的快速測定引起了人們極大的興趣。韓樹波等（4）研制成功一種新的伏安型細(xì)菌總數(shù)生物傳感器（見圖2），通過對電極及其輔助測定裝置的設(shè)計，可使測定下限達(dá)3x104 cells，測定周期在0.5 h左右。用菌懸液抽濾制成細(xì)菌阻留膜，立即把此膜附著在無菌罩中的修飾電極上，用濾膜定位裝置將電極及起濾膜固定于彈性電解池底部，記錄伏安掃描曲線，所得峰電流值與相應(yīng)樣品的校正工作曲線相對照，計算細(xì)菌總數(shù)。大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、啤酒酵母菌的線性響應(yīng)范圍依次是2x 104一4.8x107,2x104一4.60x 1 07,3x 1 04一9.16x107, 2 x 104一9.60x 107,2x 104一9.60x 107 cells。

2.3 用于監(jiān)測硫化物的生物傳感器

硫化物的測定在環(huán)境監(jiān)測中居重要地位。目前常用的測定方法有亞甲基藍(lán)比色法、碘量滴定法和電位滴定法等（5）。這些方法往往需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理，不但藥品消耗量大，而且易造成測定誤差。白志輝等用硫化物桿菌制成硫化物傳感器，用于對生活污水、工業(yè)廢水、含HZS氣體等基體復(fù)雜的樣品中的硫化物的測定（6）。該方法是從硫鐵礦的酸性土壤中分離、篩選出氧化硫硫桿菌，將其固定化，制備成微生物膜，再與氧電極組裝成微生物傳感器，用于樣品中微量硫化物的測定。實驗研究表明:該傳感器響應(yīng)S2-質(zhì)量濃度線性范圍為0.06一1.50 mg/L，響應(yīng)時間為3- 6 m in,30 d 內(nèi)測定500余次，靈敏度保持不變。

2.4 用于測定酚的生物傳感器

酚是水系“五毒”之一，對其實施有效的監(jiān)測具有重要意義。測定酚的生物傳感器有酶電極、微生物電極和植物組織電極，它們都基于以下反應(yīng):

苯酚 十 O2+ 2 H++酪氨酸酶一鄰苯二酚
鄰苯 二 酚 十O2+酪氨酸酶一鄰苯二醌

兩步 反 應(yīng) 均需要大量的氧，據(jù)此可將酪氨酸酶或富含酪氨酸酶的新鮮蘑菇、土豆、香蕉等植物組織切片與溶氧電極結(jié)合制成測定酚的生物傳感器。穆冬燕等研究了用麥芽糊精修飾的酪氨酸酶碳糊電極構(gòu)成電流型生物傳感器測水中酚類污染物質(zhì)的方法，在外加電壓為一100m V（v s.SCE）,p H 為5.40的磷酸鹽緩沖溶液中，苯酚濃度為2.0 x 10-7——1.0 x 10-5 mol/L的范圍內(nèi)電極電壓與苯酚的濃度有良好的線性關(guān)系。檢出下限為1.0 x 10-7moUL，響應(yīng)時間為2 min。此電極對其他酚類物質(zhì)如鄰苯二酚、對氯苯酚、鄰甲酚等都有良好的響應(yīng)。可以利用此電極檢測工業(yè)廢水中的酚類物質(zhì)的濃度[7]。

馮治平等〔8〕從蘑菇組織中提取鄰苯二酚粗酶，利用絲素蛋白在甲醇作用下，其分子結(jié)構(gòu)由可溶性任意卷曲結(jié)構(gòu)向不可溶性刀- sheet發(fā)生轉(zhuǎn)變，從而將鄰苯二酚粗酶固定在絲素蛋白膜中，制得鄰苯二酚酶傳感器，該傳感器在pH為6.0的KH2PO4,-Na2HPO4,工作介質(zhì)中具有良好的響應(yīng)特性，工作線性范圍為1.0x 1 0-5- 2 .5x 1 0-4m ol/L，檢測限5.0x 10-6mol/L，響應(yīng)時間2 min,酶經(jīng)絲素蛋白的固定后具有較強的耐熱性能，并能較長時間保持酶的活性。該傳感器在KH2PO4,- N a2HPO4,緩沖溶液中保存，其使用壽命高達(dá)兩個月。

2.5 用于測定有機農(nóng)藥的生物傳感器

隨著農(nóng)業(yè)技術(shù)的發(fā)展，在許多國家，除草劑的使用量已超過了殺蟲劑和殺菌劑（9）。李建平等利用除草劑對植物類囊體束縛酶分解過氧化氫的作用，研制了一種快速檢測痕量除草劑的電化學(xué)生物傳感器叫，實現(xiàn)了現(xiàn)場監(jiān)測。

2.6 其他的生物傳感器

T. C ha rle sP aul等〔11）研究了一種用多孔氣體滲透膜、固定化反硝化細(xì)菌和氧電極組成的微生物傳感器，可以測定樣品中硝酸鹽濃度。由于反硝化細(xì)菌以硝酸鹽作為唯一能源，故其選擇性和抗干擾性相當(dāng)高，不受揮發(fā)性物質(zhì)（如乙酸、乙醇、胺類）或不揮發(fā)性物質(zhì)（如葡萄糖、氨基酸、K+,Na+）的影響，通過氧電極電流與反硝化細(xì)菌耗氧之間的線性關(guān)系來推知硝酸鹽的濃度。繆惺 清 等 〔12〕利用N3-[（3一二甲氨基）]- N‘一乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC ）和經(jīng)基唬拍酸酞亞胺（NHS）對經(jīng)11一硫醇十一烷酸單分子層修飾的石英晶體電極表面活化，將多私菌素（PMB）共價結(jié)合到電極的表面，建立了一種可用于檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的石英晶體微天平生物傳感器。李 百祥 等 研制了一種快速、靈敏、簡便的檢測水中急性毒物的生物傳感器〔13）。該傳感器采用細(xì)胞固定化技術(shù)將發(fā)光菌固定化成膜作為敏感元件，與高靈敏度的硅光二極管緊密結(jié)合，利用明亮發(fā)光桿菌的細(xì)胞發(fā)光作用作為毒性的判斷指標(biāo)。將細(xì)胞固定化技術(shù)、生物傳感器技術(shù)和發(fā)光細(xì)菌毒性檢測技術(shù)有機結(jié)合，構(gòu)建成一種流通式急性毒物快速測定儀。